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若不知如何恰當(dāng)?shù)厝芙饽臉悠?,尤其是如何溶解疏水性的多肽,往往會給您的實驗開展帶來困難。測定多肽最佳溶解條件,對樣品的消耗是不可避免的,若消耗過多,可能造成剩余的關(guān)鍵多肽樣品不足以完成您的后續(xù)實驗。


強耀生物提供溶解測試服務(wù),可以幫您更加從容地應(yīng)對疏水性多肽。您將無需再通過額外實驗估測樣品的溶解性質(zhì),由我們來為您提供完整的、量身定制的多肽溶解特性報告,專門為您解決多肽溶解性質(zhì)的疑問。

合適的多肽溶解多肽分析實驗成功的重要因素。多肽溶解不當(dāng)或溶解不充分會導(dǎo)致多肽濃度計算不準(zhǔn)確,并可能會引起實驗誤差,或者導(dǎo)致實驗失敗。


建議先用少量肽來試驗最適溶解方法,只有當(dāng)多肽完全溶解后,才能加入溶液并將之稀釋至最終濃度。即先溶解,后加入緩沖液。注意,總是將多肽加入到適當(dāng)溶劑中攪拌,而不能采用其它方式。

凍干多肽的保存

所有標(biāo)明"保持凍干"的產(chǎn)物,都必須保存在冰凍條件下,最好-20℃,若保存在-80℃以下,大多數(shù)肽可維持幾年的活性。


當(dāng)使用冰凍產(chǎn)品時,開蓋之前,瓶或試管應(yīng)在裝有新鮮干燥劑的干燥箱內(nèi)升至室溫。對于保存于-20°C的產(chǎn)品,這個過程需要一小時或更長,隨包裝大小而異。否則,當(dāng)瓶打開時,水氣進入導(dǎo)致多肽凝縮而降低其穩(wěn)定性。一旦打開,應(yīng)迅速稱量完畢,并立即密閉以免潮解,尤其親水肽更應(yīng)注意。

多肽溶液的保存
多肽溶液比干粉的穩(wěn)定性差很多,為了得到最好結(jié)果,遵循下列原則:

反復(fù)凍融有損于肽的活性,所以建議分裝成小包裝保存。需要多少解凍多少,用后剩余者棄掉。
溶于PH5-7無菌的緩沖液中,貯存于-20℃。
包含Cys、Met、Trp、Glu、Asp的多肽易于氧化,因此須保存在無氧化劑的環(huán)境中。
由于細(xì)菌能降解多肽,因此貯存前必須過濾除菌。
Q
多肽合成的基本原理是什么?
多肽固相合成法是多肽合成化學(xué)的一個重大的突破。它的最大特點是不必純化中間產(chǎn)物,合成過程可以連續(xù)進行,進而為多肽合成的自動化奠定了基礎(chǔ)。目前全自動多肽合成,基本都是固相合成。
Q
多肽如何溶解以達(dá)到最大溶解濃度?
溶解多肽是非常復(fù)雜的事情,一般很難一下子確定合適的溶劑。通常是先取一點試驗,在沒有確定合適的溶劑前千萬不要全部溶解。 對于常規(guī)溶解,有如下幾條建議: (1)超聲波可以增加多肽的溶解性; (2)10%的乙酸有助于溶解堿性多肽; (3)10%的碳酸氫銨有助于溶解酸性多肽; 對于在水溶液中溶解度極低的多肽,應(yīng)先嘗試用有機溶劑(例如DMSO,異丙醇,甲醇,乙腈)溶解,一旦多肽全部溶解,逐漸加水稀釋到指定濃度。
Q
如何定義多肽的純度?
多肽的純度通常是通過HPLC,用每分鐘1%的標(biāo)準(zhǔn)乙腈梯度來檢測決定的。合成過程中,氨基酸之間的交聯(lián)效率不是總能達(dá)到100%,因而產(chǎn)生一系列的氨基酸缺失的雜質(zhì)。大多數(shù)這樣的氨基酸缺失的雜質(zhì)在純化過程中都被去掉了,但有少數(shù)的雜質(zhì)其色譜表現(xiàn)與目標(biāo)多肽很相近。這些氨基酸缺失的雜質(zhì)肽留在了多肽樣品中就構(gòu)成了余下的幾個百分點。
Q
如何對合成的多肽進行質(zhì)檢?
通常以質(zhì)譜法測定肽的分子量來確定產(chǎn)品是否正確,MS檢測結(jié)果還可顯示大部份的主要雜質(zhì)。如果必要,還可提供肽凈含量檢測,如氨基酸分析或元素分析。這些方法可以證實多肽的氨基酸組成,他們均可作為多肽確認(rèn)的補充方法。
Q
為什么有些多肽的合成產(chǎn)率或純度會比較低?
多肽合成與引子合成有比較大的區(qū)別,不能合成的引子很少,但是不能合成的多肽經(jīng)常有。如Val,Ile,Tyr,Phe,Trp,Leu,Gln,和Thr這些氨基酸比鄰或重復(fù)時,多肽鏈在合成過程中不能完全舒展溶解,合成效率下降。
Q
做免疫用的多肽多長合適?
一般約10-15個氨基酸,當(dāng)然長一些免疫效果好一些,不過合成費用也會增加。MAP多肽則希望長度在15aa以上,效果較好。另外,10aa以下的多肽免疫效果比較差。
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